细胞冻存液怎么配

细胞冻存液怎么配

1、 配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的冻存培养

2、 取对数生长期的细胞,去除旧培养液,用PBS清洗

3、 去除PBS,加入适量胰蛋白酶(覆盖培养皿表面)把单层生长的细胞消化下来

4、 离心1000rpm,5min

5、 去除胰蛋白酶,加入适量配制好的冻存培养液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml~1×107/ml

6、 将细胞分装入冻存管中,每管1~1.5 ml

7、 在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者

8、 冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/min当温度达-25℃以下时,可增至-5℃~-10℃/min到-100℃时,则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h,然后放入-70℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内。

细胞冻存液怎么配

冻存:吸去培养基-pbs洗-胰酶消化-加培养基终止消化-离心-冻存液重悬(可以直接放入-80过夜然后放入液氮)

复苏:用培养基直接吹打冻存管里的细胞快速融化-离心-培养基重悬-移到培养瓶或皿中-晃匀-培养