由于光会阻碍组织的脱分化，所以脱分化培养阶段应避光培养，在无光的条件下愈伤组织长得更快。愈伤组织培养最初避光培养，后期见光培养，再分化时需照光。
脱分化（dedifferentiation）已经分化的植物器官、组织或细胞，当受到创伤或进行离体（也受到创伤）培养时，已停止分裂的细胞，又重新恢复分裂，细胞改变原有的分化状态，失去原有结构和功能，成为具有未分化特性的细胞。
脱分化又称去分化。是指分化细胞失去特有的结构和功能变为具有未分化细胞特性的过程。在动物中， 去分化细胞具有胚胎间质细胞的功能。在植物中， 去分化细胞成为薄壁细胞， 称为愈伤组织(callus)。去分化往往随之又发生再分化(redifferentiation)。
外植体脱分化形成的愈伤组织没有叶绿体，不进行光合作用，这个阶段中其营养物质是从培养基获得的。
光照可能会灼伤新分化的组织，避光培养有利于愈伤组织的再分化。
