不能低于三分之一。
酒精灯内的酒精不能少于三分之一，不能多于2/3因为酒精灯少于三分之一时，酒精灯里面残存的空气和酒精的混合物易产生爆炸，多于三分之二时，酒精又易溢出，引燃整瓶酒精，产生外部燃烧，造成酒精灯爆炸，发生火灾等危险。
使用酒精灯时，酒精不可少于1/4。
酒精灯是以酒精为燃料的加热工具，广泛用于实验室，工厂，医疗，科研等。由于其燃烧过程中不会产生烟雾，因此也可以通过对器械的灼烧达到灭菌的目的。
又因酒精灯燃烧过程中产生的热量，可以对其他实验材料加热。它的加热温度达到400—1000℃以上。且安全可靠。酒精灯又分为挂式酒精喷灯和坐式酒精喷灯以及本文所提到的常规酒精灯，实验室等一般以玻璃材质最多
酒精灯中酒精不能少于其容积的1/4。
酒精灯内的酒精不能超过灯壶容积的2/3，不能低于其容积1/4。
新灯或旧灯壶内酒精少于其容积1/4的都应添加酒精。酒精不能装得太满，以不超过灯壶容积的2/3为宜。酒精量太少则灯壶中酒精蒸气过多，易引起爆燃酒精量太多则受热膨胀，易使酒精溢出，发生事故。
添加酒精时一定要借助个小漏斗，以免将酒精洒出。燃着的酒精灯，若需添加酒精，必须熄灭火焰。决不允许燃着时加酒精，否则，很易着火，造成事故。万一洒出的酒精在桌上燃烧起来，要立即用湿棉布铺盖灭。用完酒精灯，火焰必需用灯帽盖灭，不可用嘴吹灭。
新灯加完酒精后须将新灯芯放入酒精中浸泡，而且移动灯芯套管使每端灯芯都浸透，然后调好其长度，才能点燃。因为未浸过酒精的灯芯，一经点燃就会烧焦。
